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MGC80-3胃癌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)MGC80-3胃癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1-AMinonapthelene 3,6,8 trisulfonic acid disodiuM 8-氨基萘-1,3,6-三磺酸 117-42-0
1,3,5-Benzenetricarboxaldehyde 均苯*醛 3163-76-6
1g 38588-64-6
1,3,5-Benzenetrisulfonic acid trisodiuM salt 43052-65-9
SURAMIN 145-63-1
1,3,5-TriaMinobenzene trihydrochloride 1,3,5-三氨基苯 108-72-5
1,3,5-TriaMinobenzene trihydrochloride 1,3,5-三氨基苯盐酸盐 638-09-5
1,3,5-Triazatricyclo[3.3.1.13,7]decan-2-aMine(9CI) 115519-84-1
tetrahydro-1,3,5-triazin-2(1H)-one 7098-14-8
1,3,5-Triazine 1,3,5-三嗪 290-87-9
1,3,5-TRIAZINE-2,4,6-TRIAMINE, POLYMER WITH FORMALDEHYDE, METHYLATED 1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺与甲醛和甲缩醛的聚合物 68002-20-0
1,3,5-triazine-2,4,6-triyltrinitrilohexaMethanol 531-18-0
Teroxirone 1,3,5-三缩水ganyou-S-三嗪三酮 2451-62-9
1,3,5-Tri-O-acetyl-2-deoxy-D-erythro-pentofuranose 1,3,5-三乙酰基-2-脱氧-D-赤式戊呋喃糖 4594-52-9
1,3,5-Tris(3-broMophenyl)benzene 1,3,5-三(3-溴苯基)苯 96761-85-2
1,3,6,8-Pyrenetetrasulfonic acid tetrasodiuM salt 1,3,6,8-芘四碳酸四钠盐 59572-10-0
1,3,6,8-Pyrenetetrasulphonic acid 6528-53-6
1,3,6-HEXANETRICARBONITRILE 1,3,6-己烷三腈 1772-25-4
1,3,6-Octatriene,3,7-diMethyl-, (3Z)- ferric aMMoniuM oxalate 罗勒烯 异构体混合物 3338-55-4
POLY(M-XYLYLENEDIAMINE-ALT-EPICHLOROHYDRIN), DIAMINE TERMINATED 135470-04-1
4-(4,6-Diphenyl-1,3,5-triazin-2-yl)benzene-1,3-diol 38369-95-8
1,3-Benzenediol,4-pentadecyl- 16825-54-0
1,3-Benzodioxol-4-aMine,6-Methoxy-(9CI) 6-甲氧基-4-氨基-1,3-苯并二氧戊环 401811-81-2
1,3-Benzodioxole-5-ethanaMine 3,4-亚甲二氧* 1484-85-1
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。