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NCI-H446 [H446]小细胞肺癌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)NCI-H446 [H446]小细胞肺癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞NCI-H446 [H446]小细胞肺癌细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1H-BenziMidazole-4-carboxylicacid,Methylester(9CI) 1H -苯并[D]咪唑- 4 -羧酸甲酯 37619-25-3
1H-benzo[d]iMidazol-5-ylboronic acid 1H-BENZO[D]IMIDAZOL-5-YLBORONIC ACID 1228183-22-9
5-hydroxy BenziMidazole 1H-苯并咪唑-5-醇 41292-65-3
COBRATEC(R) 122 1H-苯并三唑-1-基-N,N-二(2-乙基己基)-4-甲基甲胺 80584-90-3
1-Hexanethiol,6-aMino-, hydrochloride (1:1) 6-氨基-1-巯基己烷盐酸盐 31098-40-5
1H-IMIDAZO[4,5-B]PYRAZINE 273-94-9
1H-iMidazol-2-aMine 2-氨基咪唑硫酸盐 42383-61-9
1-HEPTEN-3-OL 1-庚烯-3-醇 4938-52-7
英文名称 中文名称 CAS号
10-HydroxycaMptothecin 10-* 19685-09-7
10-HydroxycaMptothecin 10-* 64439-81-2
10-Hydroxydecanoic acid 10-羟基癸酸 1679-53-4
10-Keto DextroMethorphan 57969-05-8
Sucrose octasulfate sodiuM salt 蔗糖八硫酸酯钠 74135-10-7
3-HEXYN-1,6-DIOL 85655-98-7
10-Methylacridin-10-iuM-9-aMine broMide 64046-88-4
10-Methylundecanoic acid 10-甲基十一烷酸 2724-56-3
NEOXANTHIN 新黄质 14660-91-4
10Mg 阿江榄仁酸 465-00-9
2,6,10-TRIMETHYLDODECANE 3891-98-3
11-AMinoundecyltriethoxysilane 11-氨基十一烷基三乙氧基硅烷 116821-45-5
1-10g
115571-66-9 115571-66-9
11-ALPHA-HYDROCORTISONE 11- 566-35-8
11b-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione 11b-羟基-雄甾-4-烯-3,17-二酮 564-33-0
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。