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AGS胃腺癌细胞上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)AGS胃腺癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1-AMino-piperidin-3-ol 151666-28-3
1-AMINO-PYRROLIDIN-2-ONE 6837-14-5
ANILINE (13C6) 100849-37-4
10g 104112-34-7
Maytansine 美坦新 35846-53-8
N-DesMethyl Trifluoperazine Dihydrochloride 2804-16-2
XYLOBIOSE 木二糖 6860-47-5
1,2-O,O-DITETRADECYL-RAC-GLYCEROL 1,2-O-双十四烷基-rac-ganyou 36314-51-9
octadecane-1,2-diol 硬脂二醇 20294-76-2
2-Chloro-1-propanol 2-氯-1-羟基丙烷 78-89-7
1,2-Pyrrolidinedicarboxylicacid, 4-hydroxy-, 1,2-bis(1,1-diMethylethyl) ester, (2S,4R)- (2S,4R)-双-叔丁基4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯 170850-75-6
1,3 DIISOPROPOXY TETRAMETHYL DISILOXANE 18106-50-8
1,3-DiIsoPropoxyBenzene 1,3-二异丙氧基苯 79128-08-8
1,3,2-Dioxaphosphorinane,2-hydroxy-5,5-diMethyl-4-phenyl-, 2-oxide,(4S) 98674-81-8
1,3,3-TRIMETHOXYPROPENE 17576-35-1
1,3,4,6,7,8-HEXAHYDRO-1-METHYL-2H-PYRIMIDOL[1,2-A]PYRIMIDINE 7-甲基-1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯 84030-20-6
1,3,4,6-TETRA-O-ACETYL-2-DEOXY-D-GALACTOPYRANOSE 75828-75-0
1,3,5,7-TetravinyltetraMethylcyclotetrasiloxane 1,3,5,7-四乙烯基-1,3,5,7-四甲基环四硅氧烷 27342-69-4
β-Estradiol 3-(β-D-glucuronide) sodiuM salt 14982-12-8
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。