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BEL-7402肝癌细胞 上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)BEL-7402肝癌细胞 :
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞 ,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1,4-dihydronicotinaMide Mononucleotide 4229-56-5
1,4-dihydronicotinaMide riboside 19132-12-8
Dihydropyridine 3337-17-5
1,4-Dihydroxy-2-(hydroxyMethyl)-9,10-anthraquinone 22296-59-9
1,4-DIMETHYLCYCLOHEXA-1,3-DIENE 26120-52-5
1,4-DiMethylcyclohexene 70688-47-0
1,4-DINITROIMIDAZOLE 1,4-二硝基咪唑 19182-81-1
1,4-DIOXA-SPIRO[4.5]DECAN-8-OL 4-羟基环己酮乙二醇缩醛, 90+% 22428-87-1
1,4-DISILABUTANE 4364/7/2
1,4-Galactosyl
1,4-heptadiyne 66084-38-6
1,4-pentadien-3-ol 1,4-戊二烯-3-醇 922-65-6
1,4-PENTADIENE 1,4-戊二烯 591-93-5
1,4-Pentadiyn-3-ol 1,4-戊二炔-3-醇 56598-53-9
1,4-PENTADIYNE 24442-69-1
1,4-Phenylene diacrylate 6729-79-9
1,5- OCTADIEN-3-ONE 65213-86-7
1,5,2,4-dioxadithiane-2,2,4,4-tetraoxide 甲烷二磺酸亚甲酯 99591-74-9
cyclododecatriene 1,5,9-环十二烷三烯 4904-61-4
1,5-ANHYDRO-D-GLUCITOL 1,5-酐-D-山梨糖醇 154-58-5
1,5-DIBROMO-2,6-DIMETHYL-NAPHTHALENE 20027-95-6
TetraMic acid 1,5-二氢-4-羟基-2H-吡咯-2-酮 503-83-3
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。