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LTEP-a-2肺腺癌细胞上海谷研科技有限公司的原代细胞株及血清,ATCC细胞株、hyclone澳洲特级胎牛血清,优等胎牛血清,标准胎牛血清,gibco特优级胎牛血清血清,新生牛血清。
细胞术检测样品制备方法
直接标记抗体(FITC标记抗体)LTEP-a-2肺腺癌细胞:
(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞,冰上孵育10min,800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。[2]
未标记抗体间接免疫荧光标记法:
(1)收集2×106个细胞,用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次,800rpm离心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min;2ml PBS重悬细胞,800rpm离心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞,冰上放置10min,800rpm离心5min。
(4)加入饱和剂量未标记抗体,冰上放置40min,800rpm离心5min,用2ml冷的PBS 重悬细胞,800rpm离心5min,洗去未结合一抗,重复一次。
(5)加入荧光标记(FITC)标记的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm离心5min,去上清,PBS洗涤两次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞;固定待测。
(7)流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品(PI染色)的制备:
(1)待测样本制成单细胞悬液,然后200g离心5分钟,弃上清。
(2)用4℃预冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小时。
(3)调整细胞浓度为106细胞/毫升,取1毫升细胞悬液,用PBS洗三次,细胞重悬于1毫升PI染液中,37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
(4)PI染液终浓度为50微克/毫升,RNase A终浓度为20微克/毫升。
其他*产品:
1,8-dibroMonaphthalene 1,8-二溴萘 17135-74-9
1,9-Dideoxyforskolin froM Coleus forskohlii 福斯高林1,9-二脱氧 64657-18-7
英文名称 中文名称 CAS号
1,2-butadiene 1,2-丁二烯 590-19-2
1,2-cyclohexanedione 1,2-环己二酮 765-87-7
1,2-diaMino-2-Methylpropane 1,2-二氨基-2-甲基丙烷 811-93-8
1,2-dibroMo-1,1-difluoroethane 二溴二氟乙烷 75-82-1
1,2-DibroMofluoroethane 1,2-二溴氟乙烷 358-97-4
1,2-dibroMonaphthalene 1,2-二溴萘 5438-13-1
1,2-DIHEPTANOYL-SN-GLYCERO-3-PHOSPHOCHOLINE 39036-04-9
1,2-DiMethyl hydrazine540-73-8
1,2-diMethyl-3,5-dinitrobezene 616-69-3
1,2-DiMethylbenz[e]indole 1,2-二甲基-4,5-苯并吲哚 57582-31-7
1,2-Dipiperridinoethane 1,2-二哌啶基乙烷 1932/4/3
lithiuM ethylenediaMide 17096-24-1
1,2-EthanediaMine,N1,N1-bis(phenylMethyl)- N,N'-二苄基乙二胺 14165-27-6
1,2-Ethanedisulfonic acid 1,2-乙二磺酸 110-04-3
1,2-ETHANEDITHIOBIS(TRIMETHYLSILANE) S,S'-二(*基硅烷基)-1,2-乙二硫醇[醛酮类的保护试剂] 51048-29-4
1,2-Ethenedithiol 1,2-乙二硫醇 540-63-6
diisopropyl bicarbaMate 二异丙基联亚氨基二碳胺 19740-72-8
细胞冻存
1.将细胞消化下来,移入离心管离心,弃上清
2.准备冻存液比例:50%FBS+40%培养基+10%DMSO(现用现配)
3.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内.
放入-20度冰箱2-4小时后.再放入-80度冰箱过夜,第二天放入液氮罐保存
原则 慢冻速溶
4.加1.5冻存液在离心管中,将细胞吹打均匀,移入冻存管内。
冻存时间。放入4度冰箱10分钟。再放入-20度冰箱30分钟-1小时。不能超过1小时。zui后放入-80度冰箱过夜。第二天放入液氮中。