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Cellsorter高速自动细胞分选

-细胞之间应该保持多少距离

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分选前后细胞培养物的相差和荧光图像。

（a，b，c，d）NE-4C细胞，（e，f，g，h）3T3细胞，（i，j，k，l）星形胶质细胞-小胶质细胞培养物。
（a，c，e，g，i，k）在拣选之前的图像（b，d，f，h，j，l）在拣选之后的图像
在（d，h，l）的插图中示出了起作用的微量移液器的孔。

GFP标记了一部分NE-4C细胞和所有小胶质细胞。部分3T3细胞用DiI染色。分选过程去除了软件检测到的这些荧光细胞。用白框表示在分选之前在相差和荧光图像中检测到的细胞。

（c）中细胞之间的直线显示了微量移液器的路径：由于与邻居的距离比分液器的内径小得多，而相邻的单元格的分选分辨率小于50 mm，因此排除了路径外的三个细胞的分选。我们不需要在相差图像中检测星形胶质细胞（i），因为GFP标记的小胶质细胞甚至可以从紧密附着的星形胶质细胞的非常近的位置去除，而不会干扰它们。（i）中的框显示在面板k中检测到的小胶质细胞。比例尺：100um。

系统对真空进行调整并通过注射泵进行了优化，并且可以拾取至少90％的每种细胞。分选分辨率，即两个细胞之间可选择性去除的小距离为50-70微米，与我们在特定实验中使用的微量移液器孔相同。可以通过软件排除在分选解决方案中带有邻居的标记细胞。在15分钟内从培养皿中收集的大细胞数约为1,000，终受到每秒1个细胞的分选速度的限制。排序速率由软件到硬件的通信延迟确定。估计用于定位的优化硬件控制每秒可接收10个以上的单元。为了测试其他类型的细胞，我们还分选了HaCat人类角质形成细胞，HEK 293人类胚胎肾细胞。