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Cellsorter高速自动细胞分选

-拣选活细胞的真空度选择

我们使用三种不同的哺乳动物细胞类型和两种不同的荧光标记测试了该技术的分选效率：
正常3T3小鼠成纤维细胞与亲脂性荧光染料DiI染色的同种细胞混合；
NE-4C神经外胚层小鼠干细胞与表达绿色荧光蛋白（GFP）的NE-GFP-4C细胞混合；
用GFP标记的小胶质细胞对小鼠星形胶质细胞进行原代培养。

我们需要在表面固定细胞以应用该技术。我们发现，一旦细胞粘附强度得到优化，所有三种细胞类型都可以通过微量移液器轻松分类。操作的真空值可以简单地计算为注射器中的实验可控真空度减去2,000 Pa的静水压力（当注射器保持比细胞低0.2 m时）。由于伯努利定律，细胞位置处流体流动中的实际真空可能与这些值不同。（有关更多详细信息，请参见“流场测量”部分。）
弱粘附的NE-4C细胞易于在中等真空度下拾取。当细胞*粘附后，即使接种1天后仍达到26,000 Pa。尽管小胶质细胞更牢固地粘附于表面，但接种后1d可以使用220,000 Pa 的真空将其拾取，并且如MTT细胞活力测试所示，可以恢复活细胞。我们使用3T3和NE-4C细胞对细胞存活率进行了定量。为了获得存活的3T3细胞，我们在接种后1小时使用212,000 Pa 的真空对它们进行了分类。在温育期间，大多数3T3细胞发展出稳定但不牢固的附着于表面。