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赭曲霉素A (Ochratoxin A)是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物,属烈性的肾脏和肝脏,广泛存在于各种食物中。谷物及其副产品是赭曲霉素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种素污染的饲料后,会发生急性或慢性中症。防止污染赭曲霉素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链,加强对赭曲霉素A的检测十分重要。
赭曲霉素ELISA检测试剂盒采用竞争ELISA,在微孔板上预包被赭曲霉素A抗原,加入样本/赭曲霉素A标准品溶液及辣根过氧化物酶标记的赭曲霉素A抗体。样本或标准品溶液中的赭曲霉素A与预包被在微孔板上的赭曲霉素A抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的赭曲霉素A抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去,再加入显色液,读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物赭曲霉素A抗原的含量成负相关。对照标准曲线,即可得出相应残留物赭曲霉素A的含量。
【注意事项】
1. 室温低于20℃或试剂及样本没有恢复到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3. 每种试剂使用前均需摇匀。
4. 反应终止液为0.5M硫酸,避免接触皮肤。
5. 不要使用过了有效期的试剂盒;也不要掺杂使用过了有效期的试剂盒;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6. 储存条件:
试剂盒保存于2~8℃,不能冷冻,将不用的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感,因此要避光保存。
7. 试剂变质的迹象:
显色试剂有任何颜色表明显色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8. 加入显色液后,一般显色时间为15~30min。若颜色较浅,可延长反应时间到35min(或更长),但不得超过40min。反之,则减短反应时间。
9.赭曲霉素ELISA检测试剂盒反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。