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关于HPLC的常见问题及解答

来源:上海研生生化试剂有限公司2024/4/12 7:05:3315
导读:

一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,原因何在?如何解决?

  答:关于漂移问题:

  1.温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定

  2.流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等

  3.柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡

  关于快速变化问题

  1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定

  2.泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。

  3.流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合

  二、问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?

  答:1.筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。

  2.存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子

  三、问:HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法

  答:1.样品量不足,解决办法为增加样品量 医.学教育网搜集整理

  2.样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子

  3.样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器

  4.检测器衰减太多。调整衰减即可。

  5.检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数

  6.检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。

  7.检测池中有气泡。解决办法为排气。

  8.记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

  9.流动相流量不合适。调整流速即可。

  10.检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。

  四、问:做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决?

  答:原因可能有:

  1.泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理;

  2.比例阀失效,更换比例阀即可;

  3.泵密封垫损坏,更换密封垫即可;

  4.溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法;

  5.系统检漏,找出漏点,密封即可;

  6.梯度洗脱,这时压力波动是正常的。

 

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