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设置荧光分光光度计的狭缝要注意哪些事项

来源：化工仪器网2022/6/24 11:00:01211

导读:

　　荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定，不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化，从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。

　　荧光强度跟很多因素有关，如分子结构、存在状态、溶液浓度或薄膜厚度、温度、选择的激发波长、测试狭缝宽度等因素。荧光强度在不同仪器上的测量值存在较大差异，不具有可比性，但是其峰位还是较容易确定的，可以用来判断何种物质。进行荧光定量分析，必须固定一些条件。

　　狭缝的大小对荧光强度很重要，狭缝大小可根据你所测物质的荧光强度大小作出适当的调整。在同一浓度，如荧光强度过大，超过仪器量程，可减小狭缝。但是，需要指出的是，不能仅凭狭缝的大小来改变荧光强度，还要考虑分辨率的问题。对于荧光扫描而言，狭缝加大可以使荧光强度提高同时重现性得到提高，但是分辨率随之降低。狭缝决定分辨率，仪器其它结构已经固定(光栅的刻线数、焦距以及综合的线色散系数)，狭缝大小就决定分辨率的高低。对于实际使用，狭缝大小需要和测定的峰的半峰宽相匹配，过大，峰就变形了。狭缝大小也决定了光通量大小。按照经验数值，狭缝开大1倍，光通量将增大4倍。　　

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