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蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有上千种不同的蛋白质，至今还没的单独或一tao现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往采取几种方法联合使用。在这里小编就给各位小伙伴说道说道目前主流的蛋白质分离方法。

根据蛋白质溶解度不同的分离方法

（1）蛋白质的盐析

不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。中性盐(一般为硫酸铵、*、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠，其中应用z多的硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大，也不易引起变性)对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。

盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。

影响盐析的因素有：

（a）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶解度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析。

（b）pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶解度低。

（c）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。

蛋白质在用盐析沉淀分离后，需要将蛋白质中的盐除去，常用的办法是透析，即把蛋白质溶液装入秀析袋内（常用的是玻璃纸），用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，因透析所需时间较长，所以在低温中进行。此外也可用葡聚糖凝胶TandexG-25F或TandexG-50过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。

（2）等电点沉淀法

蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力小，因而溶解度也小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。

（3）低温有机溶剂沉淀法

用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。

根据蛋白质分子大小的差别的分离方法

（1）透析与超滤

透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。

超滤法是利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜上，可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。

（2）凝胶过滤法

也称分子排阻层析或分子筛层析，这是根据分子大小分离蛋白质混合物z有效的方法之一。柱中z常用的填充材料是葡聚糖凝胶（Tandex系列）琼脂糖凝胶（Tanrose 系列）和琼葡糖凝胶（SuperTandex pg系列）。

根据蛋白质带电性质进行分离方法

（1）电泳法

各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。

（2）离子交换层析法

离子交换剂有阳离子交换剂（如：SP Tanrose 6FF）和阴离子交换剂（Q Tanrose 6FF），当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，随后用改变pH或离子强度办法将吸附的蛋白质洗脱下来。

根据配体特异性的分离方法－亲和层析法

亲和层析法（Affinity chromatography）

分离蛋白质的一种极为有效的方法，根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合进行分离。它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。