无菌棚,无尘棚,无菌室
什么是无菌棚,无尘棚,无菌室?
无菌棚一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约4—5平方米即可，高2.5米左右。无菌棚外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌棚的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌棚和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。

一、无菌棚,无尘棚,无菌室标准化规程与验收规范：

1.目的
本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
2、适用范围、生测实验室。
3、责任者、QC主管生测员。
4、定义无
5、安全注意事项；
严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

二、规程：
1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 

2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 

3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 

4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的....1%的新洁尔灭溶液，等等。 

5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 

6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 

7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 

8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 

9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70%的酒精棉球消毒外表面。 

10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 

11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 

12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 

13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 

14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 

15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水下冲洗，严禁污染下水道。 

16.无菌室应每月检查菌落数。在 超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。
100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级 洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行*消毒，直至重复检查合乎要求为止。

三、技术指导说明：
在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。

外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。
一方面是*灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。为了这些目的，在微生物学中，有许多措施。 

无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面1 米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。 
当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。

通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。

而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。 
在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。

正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。

四、应用：
无菌室一个应用行业非常广泛的基础性配套产业，目前在电子信息、半导体、光电子、精密制造、医药卫生、生物工程、航天、汽车喷涂等众多行业均有应用，并根据行业的精密与无尘要求，等级差别也较大。 
目前级别zui高的当属航天的仓，基本是属于1级，属于特殊领域，面积相对较小。 
另外对级别要求较高的是生化实验室和高精纳米材料生产车间，物联网芯片的发展将是未来需求的一大方向。 
随着电子元器件向微小化方向发展，液晶面板已经升级至第八代，行业需求非常巨大。

五、的要求：
1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及杀菌 
2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。 

3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。 

4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供消毒空气用紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。 

5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。 

六、的使用与管理： 
（1） 无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。不要放与检测无关的物品 

（2） 室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。 

（3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，zui后紫外灯杀菌半小时 

（4）定期检查室内空气无菌状况，细菌数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即*消毒灭菌。无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米），置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测细菌总数应置37℃温箱培养48小时；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。细菌`霉菌总数均不得超过10个为 。 

（5）无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯杀菌30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用 

（6）进入无菌室前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。 

（7）操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。
器材及场所的灭菌消毒。

微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对象采用不同的处理方法； 
1．高压蒸汽灭菌: 工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理。 

2．火焰灭菌： 接种针、接种环等可直接火焰灭菌 

3．高温干燥灭菌： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃灭菌2小时 

4．一 般消毒: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来...溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。 

5． 空气的消毒： 开启紫外灯照射30—60分钟 即可。

七、操作要领：
准备工作
1．*行无菌室空间的消毒，开启紫外灯30—60分钟 

2．检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会灭菌消毒 

3．操作人员必须将手清洗消毒，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室 

4．进入无菌室后再一次消毒手部，然后才进行检验操作 

八、操作过程注意事项：
1．动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境 

2．操作应在近火焰区进行。 

3．接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧灭菌 

4．使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用洗耳球操作。 

5．观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝。 

6．进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗涤。 
7．工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，zui后用消毒液擦拭工作台。 

九、微粒污染控制：
无菌室外源性污染源，主要是通过门和无菌室内外通道侵入的室外空气。因此无菌室的布置通常都采用按照工艺操作的关键程度，洁净度的高低由里往外逐级减弱，抵御室外污染空气的侵入。

同时为物料和人员进出无菌室设置相应的控制措施，例如物料的气闸、人员的无菌更衣系统以及室内废弃物传递出来的通道等。无菌室内的污染源，主要来自于无菌室内必要的操作人员和部分工艺设备，通常无菌室内操作人员的四周区域是洁净度zui差的区域，也是无菌技术中重要的控制内容。
 
在无菌室的设计中，通过向室内输送定量的洁净空气，稀释置换室内已使用过的洁净空气，将脏空气排出室外，使室内的空气洁净度等级达到100000级、10000级或局部达到100级的空气洁净度要求，室内已使用过的脏空气由清洁的空气取代，在空气的稀释置换设计中，脏空气与清洁空气持续地混合稀释，逐渐减少房间中的微粒负荷。

置换稀释设计对洁净区域的空气净化系统的设计有很高的要求，而且必须考虑无菌室的布局和操作方式，还要为关键区间提供合适的局部单向空气流动保护，需要注意与空气净化系统供应的空气一样，满布高效空气过滤器的单向流动罩产生的空气流动也可以置换稀释房间中空气传播的微粒，这种空气流动会增加有效的房间空气交换率，并有助于污染空气置换稀释。

无菌室内空气置换稀释污染系统设计时应注意：洁净空气供应的体积应足以抵消空间中不断产生的微粒数，以此维持工艺操作的基本条件要求；室内空间供应的空气应比普通维持条件下空气更清洁；要求混合供应的清洁空气应满足去除房间内含有微粒的空气，以达到室内空气置换稀释的作用。

无菌室内天花板应与风管、管道、灯具、风口等的安装脱开，光滑、无裂缝，易于清洗。无菌室的门窗材料应选择耐受性好、自然变形小、制造误差小、容易控制缝隙、气密性好的材料，采用双层中空玻璃结构的双层窗，既节约空间、又节约能源，还可以避免玻璃窗结露引起霉变，造成污染；窗尽量采用大玻璃，这样可减少积灰点，又有利于清洁工作。
 

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