虾碱性磷酸酶 (SAP)

Applied Biosystems虾碱性磷酸酶 (SAP)

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具体成交价以合同协议为准
2023-09-25 17:38:58
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产品简介

虾碱性磷酸酶 (SAP)

详细介绍

性能经证实 – 基准磷酸酶
•在 65°C 下 15 分钟内可达到 99% 热灭活
•显著改善了低温储存的稳定性(参见图 1 和 2)
•具有较高的比活度 (参见图 3)
•可去除 DNA、RNA、dNTP 和蛋白中的 5'-磷酸盐
•从重组来源纯化
•可直接添加到限制性内切酶消化物中
•无需纯化载体
•无需补充锌或其他活性添加剂
•可直接在多种不同的缓冲液中使用
•在 DNA 测序或 SNP 分析之前,易于去除 PCR 产物中未掺入的 dNTP

USB Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) 是一种高比活度、不耐热型重组碱性磷酸酶,最初从 Pandalus borealis(北极虾)中分离出来。SAP 可用于多种分子生物学应用,如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团,用于后续的克隆和探针末端标记。进行克隆实验时,去磷酸化可防止线性质粒 DNA 自连。SAP 也可以用来去除 PCR 反应中的 dNTP,用于制备 DNA 测序和 SNP 分析模板

虾碱性磷酸酶与小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase,以下简称 CIAP)的比活度大致相同,并且与 CIAP 一样,在几乎所有限制性内切酶反应缓冲液中均有活性。与 CIAP 不同的是,通过 65°C 15 分钟的热处理,虾碱性磷酸酶可不可逆地灭活。

Shrimp Alkaline Phosphatase 特别适用于制备 PCR 产物,用于测序、SNP 分析或标记方法相关的应用。通常,PCR 反应后剩余的过量 dNTP 会干扰随后涉及 DNA 合成的酶反应。只需一个简单的步骤就可用 SAP 将 PCR 混合物中剩余的所有 dNTP 去磷酸化。

我们还提供了基准重组磷酸酶。重组 SAP 消除了对动物来源的依赖,具有较高的储存稳定性和批间一致性等额外优点,同时具有出色的酶活性,可 99% 热灭活。

特性:
分子量:同源二聚体。测定氨基酸序列,得出单体分子量为 55 kDa。
pH 值:溶于缓冲液时 pH 值 10.4,溶于 Tris 缓冲液时 pH 值 8.0。
温度:37°C
热灭活:65°C 下 15 分钟
抑制剂:10 mM DTT,0.1% β-ME
反应条件:在 NaCl、KCl 中有活性。需要 Mg2+ 以达到活性。

来源:
重组

纯度:
已检测污染性核酸内切酶、核酸外切酶和核糖核酸酶。

储存缓冲液:
25 mM Tris-HCl(pH 值 7.5)、1 mM MgCl2、50% 甘油。

测定条件:
反应混合物含 100 mM (pH 值 10.4)、1 mM MgCl2、1 mM ZnCl2、10 mM 对硝基苯磷酸盐和 0.001-0.1 单位的 Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP)。监测 405 nm 处的吸光度变化(3050 µL 反应体积)。

单位定义:
一个单位是指 37°C 条件下于缓冲液(pH 值 10.4)中每分钟催化 1 µmol 对硝基苯磷酸盐水解所需的酶量。

浓度:
1 单位/µL

功能测试:
限制性内切酶酶切质粒的去磷酸化(5 – 20 pmol 5'-末端,0.1 -0.5 单位/pmol 5'-末端)。 与未处理的对照品相比,可将重新连接降至 <>

测序反应或 SNP 分析前核苷酸去磷酸化和引物降解的方案:
请参阅 USB ExoSAP-IT 方案,PCR 纯化的基准。

购买 ExoSAP-IT 会提供使用 Exonuclease I 和 SAP 进行 PCR 纯化的方法的许可证。

经功能测试的 10X SAP 反应缓冲液(随附,PN 70103):
200 mM Tris-HCl(pH 值 8.0)、100 mM MgCl2

经功能测试的 SAP 稀释缓冲液(1 mL,随附,PN 72761):
50 mM Tris-HCl(pH 值 8.0)。

参考文献:
1.RUAN, C. C., SAMOLS, S. B. AND FULLER, C. W. (1990) Comments17, (), United States Biochemical Corporation, Cleveland, OH.
2.WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res.22, 4354-4355.
3.HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques17, 858-860.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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