CRISPR/Cas9基因敲除细胞系/细胞株

赛尔瑞成采用CRISPR/Cas9系统，提供基因敲除细胞系构建服务。赛尔瑞成根据目的基因序列设计合成sgRNA，将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞，进而敲除目的基因，并进行单克隆筛选，获得基因敲除单克隆细胞系。

CRISPR/Cas9系统作为新一代基因编辑工具，因其构建方便、设计灵活，操作简单、效率高成本低，成为基因敲除的新一代利器。该系统由有DNA切割活性Cas9蛋白和识别特异靶点的sgRNA组成。Cas9是一种核酸内切酶，它和sgRNA构成的复合体能与DNA分子上的特定序列结合，并在PAM序列(几乎存在于所有基因)上游切断DNA双链。DNA被切断后，细胞会启动DNA损伤修复机制，造成基因的缺失、移码、插入等随机突变模式，达到修复双链断裂的目的，同时造成靶向基因敲除。

CRISPR/Cas9基因敲除细胞系/细胞株构建服务流程

案例展示：
1．构建慢病毒载体的crispr sgRNA的单质粒系统。
2．经过293T细胞转染，包装得到慢病毒。
3．通过慢病毒转导的方式感染目的细胞。
4．通过抗生素筛选和单克隆挑取后，扩大培养。
5．经挑取单克隆细胞后，提取得到单克隆细胞的基因组DNA，再通过PCR扩增目的基因编辑位点的上下游区段，经过TA克隆连接到PMD19T的载体上，进行测序验证，选取10个菌落测序鉴定得到单克隆的细胞是否单一。
下图是交付给客户的单克隆细胞验证结果。

T7E1酶切法突变体检测试验检测CRISPR/Cas9的编辑效率：
赛尔瑞成采用T7E1酶切法突变体检测试验检测CRISPR/Cas9的编辑效率。若sgRNA有效编辑了基因组DNA，则目的基因在修复后会出现碱基缺失突变现象，通过分析T7E1酶处理目标DNA片段的杂合链后的情况，从而验证Cas/sgRNA的编辑效率，用于筛选编辑效率高的sgRNA。

公司简介：

赛尔瑞成（北京）生命科学技术有限公司建有专业的分子生物学平台、原核发酵平台、哺乳动物细胞培养平台、蛋白纯化和制剂平台。赛尔瑞成能进行重组蛋白、多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体（包括纳米抗体、单链抗体、双特异抗体等）、细胞治疗产品的研发工作。赛尔瑞成汇聚了一批分子生物学、免疫学、细胞生物学、生物工程等方面的专家，技术团队成员均来自国内外科研院所和生物技术企业，拥有雄厚的研发实力和产品开发经验。
 

实验室建设：