小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7介绍

此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

细胞特性

1） 来源：鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞

2） 含量：>1x106 个/mL

3） 形态：不规则圆形，传代时密度要大，易分化

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接受后的处理：

1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的*培养基。

4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

小鼠白血病病毒诱发肿瘤巨噬细胞RAW 264.7*培养液配方（100 ml）：

DMEM (Invitrogen, 11960-044) 88 ml

Glutamax（invitrogen 35050-061） 1 ml

Sodium Pyruvate （invitrogen 11360-070） 1 ml

FBS (Gibco) 10 ml

采购DMEM基础培养基时要确认下培养基中*、丙酮酸钠是否添加，如果没有添加，在培养细胞时技术人员要添加*、丙酮酸钠。

气相：空气95%，二氧化碳5%；37℃培养。

参考传代周期：3-5天
参考传代比例：1：3-1：6
参考换液频率：2-3天

冻存液：90%血清，5~10%DMSO，现用现配。

RAW 264.7 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞/赛百慷（iCell）培养时注意事项

(1) 该细胞传代时不需要用*消化。传代时，吸走部分培养液，留下少许培养液（如T75培养瓶留下10ml），用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，吹打后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内。

(2) 该株巨噬细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形的细胞。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆在一起，有些细胞甚至脱落漂浮，这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来离心，细胞沉淀可以继续培养。

(3) 血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化，应选用高质量的胎牛血清。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 用细胞刮铲将细胞从培养瓶瓶壁上轻刮细胞使细胞脱落，将细胞悬液抽出到离心管内。

3. 在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：*次传代*传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时，用细胞刮铲将细胞从培养瓶瓶壁上轻刮细胞使细胞脱落，将细胞悬液抽出到离心管内。可使用血球计数板计数。

2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用配好的冻存液重悬细胞， 注意DMSO终浓度为5~10%。按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少4个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

赛百慷（上海）生物技术股份有限公司主要产品和服务介绍：

        一、原代细胞服务：
               各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源
               多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源
               原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等
               原代细胞相关技术服务及整体实验外包服务

        二、细胞系服务：
               细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书
               细胞系培养过程的技术指导
               细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等

        三、iPS细胞服务：
               iPS细胞基础培养（有滋养层or无滋养层）
               iPS细胞增殖及冷冻保存
               iPS基础培养技术实习
               新药及实验仪器上市前评估

        四、其他技术外包服务、客户定制服务等

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