含醛基或酮基的小分子蛋白的交联
时间:2024-05-03 阅读:9
通过邻羧甲基肟[o—(carboxymethyl)oximes]的形成,羧基很容易引入到酮基和醛基上。酮基也可用对肼苯甲酸(p—hydrazinobenzoicacid)衍生产生羧基,然后即可通过前面所述的方法结合于蛋白载体上。含醛基的小分子亦可通过形成schiff碱(其可用NaBH,还原而稳定)而直接结合于蛋白分子上。
目的:耦联蛋白与含酮基小分子。
操作步骤:
(1)溶解10 mmol/I邻羧甲基羟胺[。—(carboxymethyl)hydroxylamine][商品名亦称(aminooxy)aceticacid或羧甲基胺(carboxymethyoxylamine)]和4 mmol/L含酮基小分子于200 m1乙醇和20 m1 5%NaOH混合液中;
(2)加热回流90min;
(3)通过旋转薄膜蒸发减少体积,加水至40m1,用乙醚抽提;
(4)用水洗乙醚抽提物,干燥,得到干白粉产物。