SCIEX 质谱系统对人源C1酯酶抑制剂的O连接糖型表征分析
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388次众多重组治疗性蛋白中,蛋白糖基化在蛋白稳定性、体内活 性、溶解性、半衰期及免疫原性等方面起着至关重要的作用。糖 基化信息的获得有利于帮助建立重组蛋白药物中结构-功能的关 系。常见蛋白糖基化糖型分为N连接糖基化和O连接糖基化两种。 其中N糖基化糖型分析具有成熟的分析方案,通常采用单一内切酶 (PNGF)将N糖基化糖型从蛋白上酶切释放并采用2AB等试剂标 记,从而进行LC-MS分析进行糖型表征并定量。而由于不存在单一 酶能将O糖基化糖型进行酶切释放,O糖基化糖型的表征一直是业 内难点。因此急需开发一种广谱、快速的方法对重组蛋白中所有O 糖基化糖型进行表征分析。
人源C1酯酶抑制剂是一种包含478个氨基酸的糖蛋白,在其蛋 白N端包含数个可能的O糖基化位点。本文我们基于SCIEX X500B QTOF高分辨质谱系统开发了一种快速、综合的分析方法对重组蛋 白人源C1酯酶抑制剂中的O糖基化糖型进行表征分析,单针进样共 鉴定到样本中四种不同的O-糖基化糖型。该方法省事、快速,同时 也适用于其他具有挑战性的蛋白O糖基化糖型分析。
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