1、适用范围
适用于红酒、红枣、火腿肠、酸奶等基质中酸性红1的检测。

参考标准：《GB 5009.35-2016 食品安全标准食品中合成着色剂的测定》

目前酸性红1还没有具体的标准，我们根据GB 5009.35-2016的方法，优化了提取步骤，使样品在过PA小柱后，回收率高，净化效果好，方法稳定性好。

2、相关试液的配置

1. 准确称取酸性红1标准品50mg，用10%甲醇水溶液溶解并定容到50mL，得到1000µg/mL标准储备液
2. 准确移取酸性红1标准储备液 1000µg/mL 5mL，用10%甲醇水溶液稀释并定容到50mL，得到10µg/mL标准使用液
3. 提取液A配置：取100mL乙醇，50mL乙腈互溶；然后取其中140mL乙醇：乙腈（2：1）混合液，加入60mL水和2mL的氨水。
4. 柠檬酸溶液：称取 20 g 柠檬酸（C6H8O7·H2O），加水至 100 mL，溶解混匀。
5. pH=6 的水：500ml的水加柠檬酸溶液调节至 pH 到 6，如果水pH偏低于6可以直接使用。
6. pH=4的水:500ml的水加柠檬酸溶液调节至 pH 到 4。
7. 甲醇：甲酸（6：4）：取甲醇150mL+甲酸100mL。
8. 洗脱剂：先取2mL的氨水定容至100mL成为2%的氨水溶液；再用20mL的2%氨水溶液加70mL乙醇加10mL水。
9. 10%甲醇：10mL甲醇加90mL水。
10. 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45µm滤膜过滤。

3、提取步骤

一、红酒

取1mL样品加入0.3mL甲酸，振荡，待净化。

二、红枣

（1）将1.000g样品置于50 mL 离心管，加入20mL提取液A，振荡2min，60℃水浴超声10min，6000rpm下离心2min，收集上清液；

（2）再向下清液加入提取液A10mL，振荡2min，水浴超声10 min，6000rpm下离心2min，收集上清液；

（3）重复（2）的过程。收集3次上清液，再次6000rpm下离心2min（为了使上清液固体颗粒减少，从而加快上样等步骤）；

（4）在40℃水浴条件下，减压蒸至约12mL，再加3mL甲酸混匀，待净化。

三、火腿肠

（1）将1.000g样品置于50 mL 离心管，加入1.0gC18粉末，加入20mL提取液A，振荡2min，60℃水浴超声10min，6000rpm下离心2min，收集上清液；

（2）再向下清液加入提取液A10mL，振荡2min，水浴超声10 min，6000rpm下离心2min，收集上清液；

（3）重复（2）的过程。收集3次上清液，再次6000rpm下离心2min（为了使上清液固体颗粒减少，从而加快上样等步骤）；

（4）在40℃水浴条件下，减压蒸至约12mL，再加3mL甲酸混匀，待净化。

四、酸奶

（1）将1.000g样品置于50 mL 离心管，加入20mL提取液A，振荡2min，60℃水浴超声10min，6000rpm下离心2min，收集上清液；

（2）在40℃水浴条件下，减压蒸至约7mL左右，再加1.5mL甲酸混匀，待净化。

4、SPE净化步骤
SPE柱：月旭Welchrom^® PA(聚酰胺)小柱，规格：1000mg/6mL。

a)活化：加入5 mL甲醇活化Welchrom^® PA柱，5mL水，5mL pH=6的水，弃去流出液。

b)上样：将提取液加入Welchrom^® PA柱中，弃去流出液，注意不要让小柱溶剂流干。

c)淋洗：依次用10mLpH=4的水，20mL甲醇：甲酸（6：4），10mLpH=7的水淋洗，弃去流出液。

d)洗脱：用15mL2%氨水：乙醇：水（2+7+1）洗脱，收集流出液，压干小柱。

e)浓缩：将收集的洗脱液在80℃水浴蒸干，再用10%甲醇水复溶并定容至2mL。

6、色谱条件

色谱柱：月旭Ultimate^®XB-C18（4.6 x 250 mm, 5 μm）
流动相：乙酸铵/乙腈梯度；

流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
柱温：30 ºC
检测波长：534 nm

7、色谱图或者加标回收率结果

图1：酸性红1标准品0.5mg/L

图2：酸性红1-红酒加标10mg/kg

图3：酸性红1-红枣加标1 mg/kg

图4：酸性红1-火腿肠加标1 mg/kg

图5：酸性红1-酸奶加标1mg/kg

表1：加标回收率测定结果

8、结论

使用月旭Welchrom^® PA柱可以快速、检测红酒、红枣、火腿肠、酸奶中的酸性红1，方法的灵敏度高，重现性好。

9、相关产品信息